RFLP og DNA-analyse applikationer

Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) er en molekylær metode til genetisk analyse, der gør det muligt for personer at blive identificeret baseret på unikke mønstre af restriktionsenzym skæring i specifikke områder af DNA.

Også omtalt som RFLP-analyse drager teknikken fordel af polymorfier i individuelle folks genetiske koder. Selvom alle medlemmer af en art i det væsentlige har den samme genetiske sammensætning, tegner disse små forskelle sig for variationer i fænotype, såsom udseende eller stofskifte, mellem individer.

RFLP-analyse teknik involverer skæring af en bestemt region i DNA med kendt variation, med restriktionsenzymer, hvorefter DNA-fragmenterne adskilles ved agarosegelelektroforese og bestemmelse af antallet af fragmenter og relative størrelser.

Et restriktionsenzym er et enzym, et proteinmolekyle, der skærer DNA på restriktionssteder. I det væsentlige brydes DNA-prøven op og fordøjes af restriktionsenzymerne. De resulterende fragmenter adskilles efter deres længder, og mønsteret med fragmentstørrelser vil variere for hver testet individ.

Den fulde RFLP-proces kræver sondemærkning, DNA-fragmentering, elektroforese, blotting, hybridisering, vask og autoradiografi. Den detekterede RFLP visualiseres ved hjælp af røntgenfilm i autoradiografi, hvor DNA-fragmenter kan ses og analyseres, efter at de er adskilt fra hinanden ved hjælp af elektroforese.

Nogle af applikationerne til RFLP-analyse inkluderer:

• DNA-fingeraftryk: Retsmedicinske forskere kan bruge RFLP-analyse til at identificere mistænkte på baggrund af bevisprøver, der er indsamlet i scener med forbrydelser.
• Faderskab: RFLP bruges også til bestemmelse af faderskab eller til sporing af aner.
• Genetisk mangfoldighed: Teknikken kan bruges til at studere udvikling og migration af vilde dyr, studere avlsmønstre i dyrepopulationer og påvisning og diagnose af visse sygdomme.

Teknikken til at bruge RFLP-detektion af variation i genomer er et vigtigt værktøj i genomkortlægning og genetisk sygdomsanalyse. Hvis man søger placeringen af ​​et bestemt sygdomsgen i et bestemt kromosom, ville forskerne gøre det analysere DNA fra medlemmer af en familie med sygdommen, og kig derefter efter lignende arvemønstre i RFLP alleler.

Når et sygdomsgen er lokaliseret, kan udførelse af RFLP-analyse på andre familiemedlemmer afsløre en bærer af de mutante gener eller signalere den samlede sygdomsrisiko. Det er vigtigt at bemærke, at RFLP-teknikken ikke bruges i vid udstrækning nu, når der anvendes nyere og mere robuste teknikker til DNA-analyse inden for retsmedicinsk videnskab og adskillige andre områder.

Desværre er RFLP-analyseteknikken kedelig og langsom. Bortset fra at kræve en stor mængde prøve-DNA - skal prøven normalt være på størrelse med et kvarter, hvilket er relativt stor til DNA-prøver - processen, fra sondemærkning til vask og autoradiografi, kan tage op til en hel måned til komplet.

Resultater fra Human Genome Project har stort set erstattet behovet for RFLP. Projektet gjorde det muligt at bestemme hele sekvensen af ​​DNA'et, der findes i humane celler, det humane genom og til at identificere alle generne i det humane genom.