For at forskellige arter kan afvige fra fælles forfædre og køre udvikling, reproduktiv isolering skal forekomme. Der er flere typer reproduktionsisolering, der fører til speciation. En af de mest almindelige metoder er prezygotisk isolering, der finder sted, inden befrugtning finder sted mellem kønsceller og forhindrer forskellige arter i seksuelt gengivelse. Grundlæggende, hvis individer ikke kan gengive sig, betragtes de som forskellige arter og divergerer på livets træ.
Der er flere typer præzygotisk isolering, der spænder fra inkompatibilitet mellem gameter og adfærd det resulterer i inkompatibilitet og endda en type isolering, som fysisk hæmmer individer fra avl.
Mekanisk isolering - uforenelighed med seksuelle organer - er sandsynligvis den enkleste måde at forhindre individer i at formere sig med hinanden. Uanset om det er formen på forplantningsorganerne, placeringen eller forskellene i størrelse der forby individer i at kobles sammen, når parterne ikke passer sammen, er parring ikke sandsynligt at forekomme.
I planter fungerer mekanisk isolering lidt anderledes. Da størrelse og form er irrelevant for planteproduktion, skyldes mekanisk isolering normalt brugen af en anden pollinator til planterne. For eksempel en plante, der er struktureret til bestøvning af bier vil ikke være kompatible med blomster, der er afhængige af kolibrier at sprede deres pollen. Selvom dette stadig er et resultat af forskellige former, er det ikke formen på de faktiske gameter, der betyder noget, men snarere uforeneligheden med blomsterformen og pollineringen.
Forskellige arter har en tendens til at have forskellige yngletider. Tidspunktet for kvindelig fertilitetscyklus kan resultere i tidsmæssig isolering. Lignende arter kan være fysisk kompatible, men gengive muligvis stadig ikke på grund af deres parringstider, der forekommer på forskellige tidspunkter af året. Hvis hunnerne af en art er frugtbare i løbet af en given måned, men hannerne ikke er i stand til at formere sig på det tidspunkt af året, kan det føre til reproduktiv isolering mellem de to arter.
Undertiden overlapper parringstider af meget lignende arter noget. Dette gælder især, hvis arten lever i forskellige områder, som ikke giver nogen chance for hybridisering. Imidlertid har det vist sig, at lignende arter, der lever i det samme område, generelt ikke har faser med overlappende parring, selvom de gør det i forskellige miljøer. Mest sandsynligt er dette en tilpasningskarakter, der er designet til at reducere konkurrencen om ressourcer og kammerater.
En anden type præzygotisk isolering mellem arter har at gøre med individernes adfærd, og især adfærden omkring parringstid. Selv hvis to bestande af forskellige arter både er mekanisk og midlertidigt kompatible, er deres faktisk parringsritualopførsel kunne være nok til at holde arten i reproduktiv isolering fra en en anden.
Parringsritualer sammen med andre nødvendige parringsadfærd - såsom parring og opkald - er meget nødvendige for mænd og kvinder af samme art for at indikere, at det er tid til at gengive sig. Hvis parringsritualet afvises eller ikke genkendes, forekommer ikke parring, og arten isoleres reproduktivt fra hinanden.
F.eks blåfodet booby fuglen har en meget detaljeret parringsdans, som mændene skal udføre for at gøre kvinden opmærksom. Kvinden vil enten acceptere eller afvise de fremskridt, der er for hanen, men andre fuglearter, der ikke har det samme parringsdans ignoreres fuldt ud af kvinden - hvilket betyder, at de ikke har nogen chance for at gengive sig med en kvindelig blåfodet booby.
Selv meget nært beslægtede arter har præferencer for hvor de bor og hvor de formerer sig. Nogle gange er disse foretrukne placeringer for reproduktionsbegivenheder uforenelige mellem arter, hvilket fører til, hvad der er kendt som habitatisolering. Selvfølgelig, hvis individer af to forskellige arter bor intet i nærheden af hinanden, vil der ikke være nogen mulighed for at gengive sig. Denne type reproduktionsisolering fører til endnu yderligere specifikationer.
Selv forskellige arter, der lever i samme landestand, er dog muligvis ikke forenelige på grund af deres foretrukne reproduktionssted. Der er nogle fugle, der foretrækker en bestemt type træ, eller endda forskellige dele af det samme træ, til at lægge deres æg og gøre deres rede. Hvis der findes lignende fuglearter i området, vil de vælge forskellige placeringer og vil ikke blive opdrættet. Dette holder arten adskilt og ikke i stand til at formere sig med hinanden.
Gametisk isolering sikrer, at kun sæd fra den samme art kan trænge ind i ægget fra den pågældende art og ingen andre. Under seksuel reproduktion smeltes det kvindelige æg med den mandlige sædcelle, og sammen skaber de en zygote. Hvis sæd og æg ikke er kompatible, kan befrugtning ikke forekomme. På grund af nogle kemiske signaler frigivet af et æg, kan sæden muligvis ikke engang tiltrækkes af det. En anden faktor, der forhindrer fusion, er en sædceller, der ikke kan trænge igennem et æg på grund af sin egen kemiske sammensætning. En af disse grunde er tilstrækkelige til at frustrere fusion og forhindre dannelse af en zygote.
Denne type reproduktionsisolering er især vigtig for arter, der formerer sig eksternt i vand. For eksempel frigiver hunnerne af de fleste fiskearter simpelthen deres æg i vandet i deres foretrukne avlssted. Hanfisk af den art kommer derefter med og frigiver deres sæd over æggene for at befrugte dem. Da dette imidlertid finder sted i et flydende miljø, bliver nogle af sædcellerne fejet væk med vandmolekyler og spredt. Var der ingen gametiske isoleringsmekanismer på plads, kunne sædceller smelte sammen med ethvert æg, hvilket ville resultere i hybrider af uanset art, der tilfældigvis parrede sig i vandet der på det tidspunkt.