Phosphatbufferet saltvand eller PBS-opløsning

PBS eller phosphatpufret saltvand er en bufferopløsning det er især værdifuldt, fordi det efterligner ionkoncentrationen, osmolariteten og pH i menneskelige legemsvæsker. Med andre ord er det isotonisk for menneskelige løsninger, så det er mindre sandsynligt, at det forårsager celleskade, toksicitet eller uønsket nedbør i biologisk, medicinsk eller biokemisk forskning.

Der er flere opskrifter til at forberede PBS-løsning. Den essentielle opløsning indeholder vand, natriumhydrogenphosphat og natriumchlorid. Nogle præparater indeholder kaliumchlorid og kaliumdihydrogenphosphat. EDTA kan også tilsættes til cellulær præparation for at forhindre klumpning.

Phosphatbufferet saltvand er ikke ideel til brug i løsninger der indeholder divalente kationer (Fe²⁺, Zn²⁺) fordi nedbør kan forekomme. Nogle PBS-opløsninger indeholder dog calcium eller magnesium. Husk også, at fosfat kan hæmme enzymatiske reaktioner. Vær særlig opmærksom på denne potentielle ulempe, når du arbejder med DNA. Mens PBS er fremragende til fysiologisk videnskab, skal du være opmærksom på, at phosphatet i en PBS-bufret prøve kan udfældes, hvis prøven blandes med ethanol.

En typisk kemisk sammensætning af 1X PBS har en slutkoncentration på 10 mM PO₄³⁻137 mM NaCl og 2,7 mM KCI. Her er den endelige koncentration af reagenser i opløsningen:

Afhængigt af dit formål kan du forberede 1X, 5X eller 10X PBS. Mange mennesker køber simpelthen PBS-buffertabletter, opløser dem i destilleret vand og justerer pH efter behov med saltsyre eller natriumhydroxid. Det er dog let at fremstille løsningen fra bunden. Her er opskrifter på 1X og 10X phosphatbufferet saltvand:

1. Opløs reagenssalte i 800 ml destilleret vand.
2. Juster pH til det ønskede niveau med saltsyre. Normalt er dette 7,4 eller 7,2. Brug en pH-måler til at måle pH, ikke pH-papir eller anden upræcis teknik.
3. Tilsæt destilleret vand for at opnå et slutvolumen på 1 liter.

Sterilisering er ikke nødvendig til nogle applikationer, men hvis du steriliserer den, fordel opløsningen i portioner og autoklaver i 20 minutter ved 15 psi (1,05 kg / cm)²) eller brug filtersterilisering.

Phosphatbufferet saltvand kan være opbevares ved stuetemperatur. Det kan også køles, men 5X og 10X opløsning kan være bundfald, når det afkøles. Hvis du skal nedkøle en koncentreret opløsning, skal du først opbevare den ved stuetemperatur, indtil du er sikker på, at saltene er helt opløst. Hvis der sker nedbør, vil opvarmning af temperaturen bringe dem tilbage i opløsning. Opbevaringstid for kølet opløsning er 1 måned.

10X er en koncentreret opløsning eller stamopløsning, som kan fortyndes til dannelse af en 1X eller normal opløsning. En 5X opløsning skal fortyndes 5 gange for at fremstille en normal fortynding, mens en 10X opløsning skal fortyndes 10 gange.

For at fremstille en 1 liters arbejdsopløsning af 1X PBS fra en 10X PBS-opløsning, tilsættes 100 ml af 10X-opløsningen til 900 ml vand. Dette ændrer kun koncentrationen af ​​opløsningen, ikke gram eller molær mængde af reagenserne. PH-værdien bør ikke påvirkes.

En anden populær bufferopløsning er Dulbeccos phosphatbufrede saltvand eller DPBS. DPBS, ligesom PBS, bruges til biologisk forskning og buffere i pH-området 7,2 til 7,6. Det kan opbevares ved stuetemperatur. Dulbeccos opløsning indeholder en lavere koncentration af fosfat. Det er 8,1 mM mM phosphationer, mens almindelig PBS er 10 mM phosphat. Opskriften på 1x DPBS er:

Opløs saltene i 800 ml vand. Juster pH til 7,2 til 76 ved hjælp af saltsyre. Juster det endelige volumen til 1000 ml med vand. Autoklave ved 121 ° C i 20 minutter.

• Dulbecco, R.; et al. (1954). "Plackdannelse og isolering af rene linjer med poliomyelitisvira". J. Exp. Med. 99 (2): 167–182.
• "Fosfatbufferet saltvand (PBS." Cold Spring Harbor Protocols (2006). Cold Spring Harbour Laboratory Press.