Natriumcitratbuffer bruges ofte til RNA-isolering, fordi den minimerer basehydrolyse af RNA-strengene, hvilket gør den uvurderlig til mRNA-oprensning under genomisk forskning og til studier af transkription. Citratbaserede buffere hjælper også med at påvise antigener i faste vævspræparater, fordi de bryder tværbindinger dannet mellem antigenerne og fikseringsmediet.
Med de følgende lette trin kan man oprette en natriumcitratbuffer med en pH på 6 (sur) på under 10 minutter.
Materialer til natriumcitratbuffer
Få materialer er nødvendige for at fremstille natriumcitratbufferen. Med citronsyre har man kun brug for 1 M natriumhydroxid, destilleret vand og en kalibreret pH-sonde. Natriumcitrat er valgfri.
Fremstilling af pufferen kræver også en 1 liters gradueret cylinder, en 1 liters målekolbe og tre 1 liters medieflasker. Endelig har du brug for en magnetisk omrørestang og en magnetisk omrører. Alt dette materiale findes på skolen, laboratorier på arbejdspladsen eller købes online eller i specialforretninger.
To muligheder for at oprette bufferen
Der er to metoder til fremstilling af natriumcitratbuffere, afhængigt af hvilke materialer der er tilgængelige for dig.
- Hvis du har både citronsyre og konjugatbasen, skal du oprette en stamopløsning af hver ved at blande 21 gram citronsyre i 1 liter destilleret vand og 29,4 g natriumcitrat i 1 liter destilleret vand.
- Hvis du kun har citronsyre til rådighed, skal du blande 2,1 gram i knap 1 liter destilleret vand.
Blanding af citronsyre og natriumcitratopløsninger
Bland 82 ml citronsyreopløsning med 18 ml natriumcitratopløsning. Til dette tilsættes nok destilleret vand til at bringe blandingens volumen til lidt under 1 liter.
Justering af pH
Mens du omrører forsigtigt opløsningen med en magnetisk omrører, skal du bruge 1 M natriumhydroxid til at justere blandingens pH til 6,0. Derefter tilsættes mere destilleret vand med en volumetrisk kolbe for at bringe det endelige totale volumen af opløsningen op på nøjagtigt 1 liter.